Ndoshta ju doni të çnatyroni një proteinë për një projekt shkencor, ose ndoshta keni lexuar për ushqimin e çnatyruar dhe doni të dini se si funksionon. Denaturimi është procesi me të cilin një proteinë humbet formën dhe strukturën e saj për shkak të veprimeve nga forcat e jashtme, duke përfshirë nxehtësinë, rrezatimin, acidet dhe tretësit. Tretësit organikë zakonisht denatyrojnë proteinat. Mënyra e saktë e denatyrimit të një proteine varet nga ajo me të cilën dëshironi të punoni, pasi të gjitha kërkojnë agjentë të ndryshëm denatyrues në nivele të ndryshme. Shumica e çdo proteine mund të çnatyrohet, megjithatë, nëse e dini se çfarë të ndryshoni në mjedisin e proteinave.
Hapa
Metoda 1 nga 2: Denaturimi i një proteine
Hapi 1. Përdorni nxehtësinë
Nxehtësia është një nga mënyrat më të lehta dhe më të zakonshme për të denatyruar një proteinë. Kur proteina në fjalë është e pranishme në ushqim, thjesht gatimi i ushqimit do të çnatyrojë proteinat. Shumë proteina mund të çnatyrohen duke i ekspozuar ato në një temperaturë prej ose mbi 100 ° C (212 ° F). Kjo lejon që proteinat të koagulohen dhe të zvogëlojnë tretshmërinë e tyre.
Kohëzgjatja e ekspozimit varet nga ajo që po ekspozoni ndaj nxehtësisë. Një vezë, për shembull, mund të gatuhet në një tigan në nxehtësi mesatare në pesë minuta, ndërsa një pjekje mund të marrë orë për t'u gatuar në një furrë
Hapi 2. Aplikoni alkool
Alkooli prish lidhjet hidrogjenike që ndodhin midis grupeve amide të një lidhje peptide. Kur një proteinë i ekspozohet një solucioni alkooli, molekulat e alkoolit formojnë lidhje të reja me zinxhirin e proteinave. Përdorni një tretësirë prej 70% alkool për të thyer murin qelizor të baktereve dhe për të denatyruar proteinën.
Alkoolet e koncentruar mund të jenë të rrezikshëm, pasi ato janë të ndezshme dhe toksike. Gjithmonë vishni pajisje të plota sigurie përfshirë doreza dhe mbrojtje për sytë dhe trajtojeni në një mjedis të sigurt, të kontrolluar nga temperatura
Hapi 3. Ndryshoni pH
Struktura e brendshme e një proteine mund të prishet kur mjedisi i saj është shumë acid ose shumë alkalik, pasi ato prishin lidhjet jonike që mbajnë urat e kripës së proteinave së bashku. Shtoni një zgjidhje acid ose bazë në proteinë. Mjedisi përreth duhet të jetë në një pH mbi 10 ose nën 4 për të inkurajuar çnatyrimin. Nëse jeni duke nxitur ndryshimin me acid, pH duhet të jetë midis 2 dhe 5.
Ndryshimi i pH mund të jonizojë një aminoacid, në varësi të pKa të secilit grup funksional në atë aminoacid. Ju gjithashtu mund të jonizoni grupin amino ose grupin karboksil të pranishëm në aminoacid
Hapi 4. Provoni kripërat e metaleve të rënda
Metalet e rënda mund të prishin lidhjet në proteinë, duke e bërë atë të humbasë strukturën e saj. Kripërat e metaleve të rënda si merkuri dhe plumbi mund të përdoren për të denatyruar proteina të ndryshme. Kripëra të tilla janë të disponueshme nga shumica e furnizuesve kimikë, dhe duhet të përdoren gjithmonë me kujdes dhe pajisjet e duhura të sigurisë, përfshirë dorezat dhe mbrojtjen e syve.
Metalet e rënda mund të ndërveprojnë me grupet anësore funksionale të një proteine për të formuar komplekse. Metalet e rënda gjithashtu oksidojnë zinxhirët anësorë të proteinave aminoacide
Metoda 2 nga 2: Renaturimi i proteinave
Hapi 1. Përcaktoni nëse një proteinë mund të rindizet
Disa forma të denatyrimit janë të përhershme, ndërsa të tjerat mund të zhbëhen. Gatimi i një veze ose mishi, për shembull, nuk mund të anulohet, por një proteinë që është ekspozuar ndaj një pH të lartë mund të rimarrë formën kur vihet në një mjedis më neutral.
Nëse proteina mund të paloset apo jo do të varet nga ADN -ja e saj. ADN -ja do të mbajë informacionin e nevojshëm që proteina të kthehet në gjendjen e saj amtare
Hapi 2. Hiq faktorin denatyrues
Kthejeni mjedisin rreth proteinës në stazë dhe hiqni elementin çnatyrues. Hiqeni acidin ose bazën, për shembull, ose sillni proteinën përsëri në një temperaturë më të arsyeshme.
Hapi 3. Përdorni një çantë rinaturimi
Shumë kompani të furnizimit me laborator shesin komplete të rinaturimit që ju lejojnë të kontrolloni parametrat më të mirë për të inkurajuar rinaturimin. Komplete të tilla mund të jenë veçanërisht të dobishme nëse shikoni proteinat në një mjedis laboratorik ose eksperimental.
Këshilla
- Një proteinë e çnatyruar humbet strukturën e saj katërshe, terciare dhe sekondare që është e dukshme në gjendjen e saj amtare, por struktura e saj parësore do të mbetet.
- Një proteinë e çnatyruar gjithashtu humbet një pjesë të bioaktivitetit të saj, në disa raste, si me enzimat, duke humbur aftësinë e saj për të funksionuar. Për shembull, substratet nuk mund të jenë më në gjendje të lidhen me enzimat që janë çnatyruar.
- Proteina e çnatyruar mund të humbasë tretshmërinë e saj në një tretësirë.
- Ju gjithashtu mund të denatyroni acidet nukleike duke përdorur teknika laboratorike për të ndarë fillesat.